Advertisement

Makalah Mikrobiologi (Isolasi Bakteri)

Makalah Mikrobiologi (Isolasi Bakteri) - Hallo sahabat Kumpulan Makalah Lengkap, Pada Artikel yang anda baca kali ini dengan judul Makalah Mikrobiologi (Isolasi Bakteri), kami telah mempersiapkan artikel ini dengan baik untuk anda baca dan ambil informasi didalamnya. mudah-mudahan isi postingan yang kami tulis ini dapat anda pahami. baiklah, selamat membaca.

Judul : Makalah Mikrobiologi (Isolasi Bakteri)
link : Makalah Mikrobiologi (Isolasi Bakteri)

Makalah Mikrobiologi (Isolasi Bakteri)

Isolasi Bakteri

PENDAHULUAN

Latar Belakang

Mikroorganisme yang ada di alam ini mempunyai morfologi, struktur dan sifat-sifat yang khas, termasuk bakteri. Bakteri yang hidup hampir tidak berwarna dan kontras dengan air, dimana sel-sel bakteri tersebut disuspensikan. Salah satu cara untuk melihat dan mengamati bentuk sel bakteri  dalam keadaan hidup sangat sulit, sehingga untuk diidentifikasi ialah dengan metode pengecatan atau pewarnaan sel bekteri, sehingga sel dapat terlihat jelas dan mudah diamati. Hal tersebut juga berfungsi untuk mengetahui sifat fisiologisnya yaitu mengetahui reaksi dinding sel bakteri melalui serangkaian pengecatan. Oleh karena itu teknik pewarnaan sel bakteri ini merupakan salahsatu cara yang paling utama dalam penelitian-penelitian mikrobiologi (Pelezar, 2008).

Metode pengecatan pertama kali ditemukan oleh Christian gram pada tahun 1884.  Dengan metode ini, bakteri dapat dikelompokkan menjadi dua, yaitu bakteri gram positif dan gram negatif yang didasarkan dari reaksi atau sifat bakteri terhadap cat tersebut.  Reaksi atau sifat bakteri tersebut ditentukan oleh komposisi dinding selnya sehingga pengecatan gram tidak bisa dilakukan pada mikroorganisme yang tidak mempunyai dinding sel seperti mycoplasma sp (Nurodin,  2009)

Teknik pewarnaan warna pada bakteri dapat dibedakan menjadi empat macam yaitu pengecatan sederhana, pengecatan negatif, pengecatan diferensial dan

dengan menggunakan larutan tunggal suatu pewarna pada lapisan tipis, atau olesan, yang sudah difiksasi, dinamakan pewarnaan sederhana. Prosedur pewarnaan yang menampilkan perbedaan di antara sel-sel microbe atau bagian-bagian sel microbe disebut teknik pewarnaan diferensial. Sedangkan pengecatan struktural hanya mewarnai satu bagian dari sel sehingga dapat membedakan bagian-bagian dari sel (Jimmo, 2008).

Isolasi adalah mengambil mikroorganisme yang terdapat di alam dan menumbuhkannya dalam suatu medium buatan. Proses pemisahan atau pemurnian dari mikroorganisme lain perlu dilakukan karena semua pekerjaan mikrobiologis, misalnya telaah dan identifikasi mikroorganisme, memerlukan suatu populasi yang hanya terdiri dari satu macam mikroorganisme saja. Prinsip dari isolasi mikroba adalah memisahkan satu jenis mikroba dengan mikroba lainnya yang berasal dari campuran bermacam-macam mikroba (Sutedjo, 1996).

Tujuan

Tujuan dari praktikum yaitu :          

1.        Mempelajari kegunaan pewarnaan untuk mempertinggi kontras antara sel bakteri dan sekelilingnya dan mengamati ciri-ciri tertentu dari bakteri.

2.        Memahami beberapa prosedur isolasi bakteri.

TINJAUAN PUSTAKA

Metode pengecatan pertama kali ditemukan oleh Christian gram pada tahun 1884.  Dengan metode ini, bakteri dapat dikelompokkan menjadi dua, yaitu bakteri gram positif dan gram negatif yang didasarkan dari reaksi atau sifat bakteri terhadap cat tersebut.  Reaksi atau sifat bakteri tersebut ditentukan oleh komposisi dinding selnya sehingga pengecatan gram tidak bisa dilakukan pada mikroorganisme yang tidak mempunyai dinding sel seperti Mycoplasma sp. (Hadioetomo, 1985).

Prinsip dasar dari pengecatan adalah adanya ikatan ion antara komponen selular dari bakteri dengan senyawa aktif dari pewarna yang disebut kromogen. Terjadi ikatan ion karena adanya muatan listrik baik pada komponen seluler maupun pada pewarna. Berdasarkan adanya muatan ini maka dapat dibedakan pewarna asam dan pewarna basa (Junaidi, 2009).

Satu sifat penting dari bakteri dalam hubungannya dengan mikrobiologi adalah kemampuan beberapa jenis bakeri untuk memproduksi struktur internal yaitu endospora. Endospora ini umumnya terbentuk secara tunggal dalam sel guna menanggulangi keadaan lingkungan yang kurang baik. Spora yang sudah masak dilepas oleh alam ke lingkungan sekitarnya. Spora-spora ini dapat dilihat di bawah mikroskop fase kontras dan nampak sebagai bagian yang bercahaya terang baik di dalam atau di luar sel. Spora-spora ini tahan terhadap keadaan fisik atau kimiawi yang ekstrim seperti suhu, kekeringan dan bahan-bahan kimia pembasmi kuman dan pertumbuhan memungkinkan, spora-spora tersebut tumbuh menjadi sel-sel vegetatif normal (Buckle, 2007).

Faktor-faktor yang mempengaruhi pewarnaan bakteri yaitu fiksasi, peluntur warna , substrat, intensifikasi pewarnaan dan penggunaan zat warna penutup. Suatu preparat yang sudah meresap suatu zat warna, kemudian dicuci dengan asam encer maka semua zat warna terhapus. sebaliknya terdapat juga preparat yang tahan terhadap asam encer. Bakteri-bakteri seperti ini dinamakan bakteri tahan asam, dan hal ini merupakan ciri yang khas bagi suatu spesies (Jimmo, 2008).

Pewarnaan yang digunakan untuk melihat salah satu struktur sel dinamakan pewarnaan khusus, sedangkan pewarna yang digunakan untuk memilihkan mikroorganisme dinamakan pewarnaan diferensial, pewarnaan gram merupakan contoh pewarnaan diferensial yang memilikan bakteri menjadi kelompok gram positif dan gram negatif.pewarnaan diferensial yang lain adalah pewarnaan Ziehl-Neelsen yang memilikan bakteri menjadi kelompok  tahan asam dan kelompok tidak tahan asam (Suriawaria, 2005).

Untuk menelaah mikroorganisme di laboratorium, kita harus dapat menumbuhkan mereka. Mikroorganisme dapat berkembang biak dengan alami atau dengan bantuan manusia. Mikroorganisme yang dikembangkan oleh manusia diantaranya melalui substrat yang disebut media. Untuk melakukan hal ini, haruslah dimengerti jenis-jenis nutrient yang diisyaratkan oleh bakteri dan juga macam lingkungan fisik yang menyediakan kondisi optimum bagi pertumbuhannya. Alat-alat yang digunakan dalam perkembangbiakan inipun harus disterilisasikan terlebih dahulu. Hal tersebut dimaksudkan agar tidak ada mikroorganisme lain, yang tidak diinginkan, tumbuh dalam media tersebut, sehingga dapat menghambat pertumbuhan mikroorganisme yang akan dibiakkan dalam media tersebut (Widjoseputro, 1989).

Ada berbagai cara untuk mengisolasi bakteri dalam biakan murni yaitu, cara pengenceran, cara penuanagan, cara penggesekan, atau penggoresan, cara penyebaran, cara pengucilan 1 sel, dan cara inokulasi pada hewan. Masing-masing mempunyai kelebihan dan kekurangan (Waluyi,2007).

Untuk metode streak plate misalnya, mikroba diletakan didalam pada ujung palte mengguanakan ose, lalu digoreskan pada permukaan medium agar tersebut dengan pola tertentu yang khas. Ada pula metode Pour Plate atau penuanga. Metode ini dapat digunakan untuk penghitungan bakteri secara langsung. Karena sebelum dituang bakteri tersebut diencerkan terlebih dahulu. Sehingga syarat penghitungan langsung yaitu dalam 1 media terdapat 30-300 koloni dapat terpenuhi (Stanier, 1982).

BAHAN DAN METODE

Bahan dan Alat

Bahan

Bahan yang di gunakan dalam praktikum ini adalah biakan bakteri berumur 24 jam, larutan biru metilen, larutan karbol fuksin basa, tinta cina, larutan nigrosin, larutan kristal violet (zat warna 1), larutan lugol (mordan), larutan aseton alkohol (larutan pemucat), larutan safranin (zat warna 2), air, suspensi bahan yang mengandung bakteri, dan medium nutrien agar.

Alat

Alat yang digunakan dalam praktikum ini adalah  jarum ose, kaca obyek biasa, lampu speritus, cawan petri steril, dan tabung reaksi berisi nutrien agar miring.

Tempat dan Waktu

Praktikum ini dilaksanakan di Loboratorium Fitopatologi Fakultas Pertanian Universitas Lambung Mangkurat Banjarbaru pada hari Selasa, 6 November 2012 pukul 14.00-16.00 WITA.

Prosedur kerja

Pengecatan Bakteri

a.         pengecatan sederhana

1.         Buat preparat ulas, kemudian fiksasi diatas api.

2.         Beri larutan zat warna. Larutan zat warna yang digunakan adalah larutan biru metilen atau larutan karbon fuksida basa.

3.         Biarkann zat warna selama 30 detik.

4.         Cuci dengan air dan keringkan dengan hati-hati dengan kertas saring.

5.         Periksa dengan mikroskop pembesaran kuat dan diberi minyak imersi. Bila preparat ulas dan teknik pewarnaan dilakukan dengan benar, maka mikroorganisme berwarna biru dengan larutan biru metilen, dan berwarna merah dengan larutan karbol fuksin basa.

b.        pengecatan negatif

1.         Ambil 2 kaca obyek. Teteskan satu tetes tinta cina atau nigrosin pada bagian ujung kanan salah satu kaca obyek.

2.         Sentuhkan ose pada biakan bakteri, kemudian campur dengan tinta cina atau nigrosin di atas kaca obyek.

3.         Salah satu sisi kaca obyek yang lain diletakkan pada campuran tinta dan bakteri (atau campuran nigrosin dan bakteri) sehingga tersebar pada seluruh sisi.

4.         Gesekkan kaca obyek sebelah kiri, sehingga campuran tinta dan bakteri (atau campuran nigrosin dan bakteri) membentuk lapisan yang tipis sekali.

5.         Selanjutnya preparat dikering-anginkan. Preparat tidak boleh dipanaskan diatas api.

6.         Periksa dengan mikroskop perbesaran kuat dan diberi minyak imersi. Bila teknik pewarnaan dilakukan dengan benar, maka mikroorganisme terlihat transparant dengan latar belakang gelap.

c.         Pengecatan gram

1.         Buat preparat ulas, kemudian fiksasi di atas api.

2.         Beri larutan kristal violet selama satu menit.

3.         Cuci denagn air.

4.         Beri larutan lugol selama 1 menit.

5.         Beri larutan pemucat selama 10-20 detik. Perhatikan waktu pemucatan, karena pemucatan terlalu lama akan memberikan hasil pewarnaan yang menyimpang.

6.         Cuci dengan air.

7.         Beri larutamn safranin selama 15 detik.

8.         Cuci dengan air, kemudian keringkan dengan kertas saring.

9.         Periksa dengan mikroskop pemberasan kuat dan di beri minyak imersi.

Isolasi Bakteri

1.      Cairkan nutrien agar (dalam labu Erlenmayer) pada penangan air.

2.      Dinginkan sampai suhu ±50⁰ C.

3.      Tuangkan medium agar tersebut kedalam cawan petri steril secara aseptik, biarkan sampai dingin dan padat.

4.      Pijarkan ose, kemudian dinginkan. Gunakan ose tersebut untuk mengambil ( satu mata ose) suspensi bahan yang mengandung bakteri secara aseptik.

5.      Ose disentuhkan pada lempengan agar dalam cawan petri dan digoreskan (goresan T atau kuadran). Sewaktu menggores ose dibiarkan meluncur di atas permukaan lempengan agar dalam cawan Petri dan digoreskan (goresan “T” atau kuadran). Sewaktu menggores ose dibiarkan meluncur diatas permukaan lempengan agar. Agar yang luka menggangu pertumbuhan bakteri sehingga sulit diperoleh koloni yang terpisah.

6.      Pijarkan ose setelah menggores suatu daerah.

7.      Balikkan cawan petri dan beri etiket pada dasar cawan. Kemudian inkubasikan pada suhu yang sesuai (37⁰ C)

8.      Ambil 1 mata ose suspensi bakteri dan gorskan pada permukaan medium agar miring dengan gerakan zig-zag.

9.      Berikan etiket pada tabung, kemudian inkubasikan pada suhu yang sesuai (37⁰C).

HASIL DAN PEMBAHASAN

Hasil

Adapun hasil dari praktikum ini adalah :

Tabe 1.  Pengecatan Bakteri (Pengecatan Sederhana)

NO.	Gambar	Keterangan
1.		Pembuatan preparat ulas dan memfiksasi di atas api
2.		Memberikan xat warna biru metilen
3.		Cuci preparat dan bersihkan dengan kapas
4.		Melihat hasil menggunakan mikroskop
5.		Hasil pembesaan menggunakan mikroskop

Table 2. Isolasi Bakteri

NO.	Gambar	Keterangan
1.		Mencairkan NA dalam penangan air
2.		Menuangkan NA pada pada cawan petrei
3.		Mengambil suspense bakteri menggunakan ose
4.		Menggoreskan jarum ose yang mengandung bakteri pada medim NA
5.		Diberi cling wolf pada cawan

Pembahasan

            Praktikum ini dibagi menjadi 2 bagian yaitu : pengecatan bakteri dan isolasi bakteri. Pada pengecatan menggunakan bakteri biakan yang berumur 24 jam dan zat warna biru metilen. Pewarnaan digunakan untuk melihat salah satu struktur sel dinamakan pewarnaan khusus, sedangkan pewarna yang digunakan untuk memilihkan mikroorganisme dinamakan pewarnaan diferensial, pewarnaan gram merupakan contoh pewarnaan diferensial yang memilikan bakteri menjadi kelompok gram positif dan gram negatif.pewarnaan diferensial yang lain adalah pewarnaan Ziehl-Neelsen yang memilikan bakteri menjadi kelompok  tahan asam dan kelompok tidak tahan asam. pewarnaan atau pengecata ini menggunakan cara pewarnaan atau pengecata sederahan. Pertama-tama memasukkan ose kedalam tabung yang berisi biakan bakteri kemudian mengoleskan pada preparat dan difiksasi setelah itu diberikan zat pewarna biru metilen. Biarkan selama beberapa detik kemudian bilas

dengan air dan keringkan menggunakan tisu. Pengeringan dilakukan agar kandungan air pada preparat tidak terlalu banyak. Setelah itu periksa dengan mikroskop dengan pembesaran kuat dan diberi minyak imersi. Minyak imersi digunakan untuk memperjelas gambar.

            Praktikum yang kedua yakni isolasi bakteri. Isolasi adalah mengambil mikroorganisme yang terdapat di alam dan menumbuhkannya dalam suatu medium buatan. Prinsip dari isolasi mikroba adalah memisahkan satu jenis mikroba dengan mikroba lainnya yang berasal dari campuran bermacam-macam mikroba Pada praktikum ini digunakan suspensi bahan yang mengandung bakteri dan nutrient agar. Mula-mula mencairkan NA yang padat dalam penangas air kemudian didiamkan sebentar hingga suhu ± 50^o C. Tuangkan larutan NA tersebut dalam cawan petri kemudian disimpan pada air laminar flow agar dalam cawan tidak terdapat embun dalam cawan. Panaskan ose kemudian goreskan pada suspense bahan yang mengandung bakteri setelah itu sentuhkan kembali ose tersebut pada cawan NA yang dibuat tadi dan menggoreskan sedikit pada NA agar yang luka mengganggu pertumbuhan bakteri sehingga sulit diperoleh koloni yang terpisah. Kemudian fiksasi dengan api sekeliling cawan dan bungkus dengan cling wolf dapa sisi cawan secara menyeluruh kemudian dibeli label.

KESIMPULAN DAN SARAN

Kesimpulan

1.        Pengecatan pada bakteri berfungsi untuk memaksimalkan seluruh dinding pada bakteri tersebut.

2.        Pengecata dapat dilakukan dengan berbagai cara diantaranya pengecatan sederhana, pengecatan negative dan pengecatan gram.

3.        Pengecatan menggunakan biru metilen akan menghsilkan warna biru sedangkan jika menggunakan karbol fuksin basa akn menghasilkan warna merah.

4.        Isolasi bakteri harus dalam keadaan steril karena jika tidak bakteri atau jamur lain akan tumbuh sehingga hasil yang di dapat bukan baktiri murni.

5.        Penggoresan pada permukaan NA berfungsi agar mengganggu pertumbuhan bakteri sehingga koloni tidak terpisah.

Saran

Adapun saran dalam praktikum ini adalah agar dalam pelaksanaan praktikum selalu memperhatikan waktu karena waktu prktikum kita terbatas dan kerjasama antar praktikan harus ditingkatkan lagi sehingga praktikum dapat berjalan dengan lancar.

DAFTAR PUSTAKA

Buckle. 2007.  Mikrobiologi Terapan.  Universitas. Gajah Mada. Yogyakarta.

Hadioetomo. 1985. Mikrobiologi Dasar Dalam Praktek. PT Gramedia. Jakarta.

Jimmo. 2008, http ://Pembuatan PReParAT dan PengeCaTAnnyA _ BLoG KiTa.mht,. diakses pada tanggal 12 November 2012.

Junaidi, W. 2009. Pengecatan Gram Pada Bakteri. http://junaidi-wawan. blogspot.com. Diakses tanggal 12 November 2012.

Nurodin, A. 2009. http://adenurodin.blogspot.com/2009/12/pembuatan-preparat-bakteri-pewarnaan.html diakses pada 12 November 2012.

Pelezar, C. 2008. Dasar-Dasar Mikrobiologi. UI Press: Jakarta

Suriawaria, U. 2005. Mikrobiologi Dasar. Djambatan. Jakarta.

Sutedjo, M. 1996. Mikrobiologi Tanah. Rineka Cipta, Jakarta.

Stanier, R. 1982. Dunia Mikroba1. Bharata Karya Aksara. Jakarta.

Waluyi, L. 2007. Mikrobiologi Umum. UMM Press. Malang.

 Widjoseputro, D. 1989. Dasar-Dasar Mikrobiologi. Djambatan. Malang.

.

 by: https://www.facebook.com/akbar.dinotrin 

Demikianlah Artikel Makalah Mikrobiologi (Isolasi Bakteri)

Sekianlah artikel Makalah Mikrobiologi (Isolasi Bakteri) kali ini, mudah-mudahan bisa memberi manfaat untuk anda semua. baiklah, sampai jumpa di postingan artikel lainnya.

Anda sekarang membaca artikel Makalah Mikrobiologi (Isolasi Bakteri) dengan alamat link http://kumpulanmakalahlengakap.blogspot.com/2014/05/makalah-mikrobiologi-isolasi-bakteri.html

Makalah Mikrobiologi (Isolasi Bakteri)